《表1 引物信息:山羊IGF-1基因的骨骼肌表达特性及其SNPs与生长性状的关联分析》

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《山羊IGF-1基因的骨骼肌表达特性及其SNPs与生长性状的关联分析》


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IGF-1:类胰岛素生长因子

参考山羊IGF-1基因全长序列(GenBank No.NC_030812.1)并根据Zhang等(2008)、Deng等(2010)和He等(2012)在该基因内含子4及5'侧翼区发现的3个SNPs(SNP-I4(intron 4),SNP-g.1617,SNP-MS(microsatellite site))位点信息,利用Primer Premier 5.0软件进行引物设计,采用荧光定量PCR仪(Roche Light cycler 96,瑞士)进行群体SNPs的HRM分型,引物(表1)由福州博尚生物技术有限公司合成。HRM扩增体系为:20×Eva green荧光染料(安诺伦(北京)生物科技有限公司)1μL,2×Easy Taq PCR Super Mix(北京全式金生物技术有限公司)10μL,上下游引物(10μmol/L)各0.15μL,1μL模板DNA,ddH2O补足至20μL;扩增条件为:95℃预变性5 min;95℃变性50 s,退火40 s,72℃延伸20 s,45个循环;72℃延伸5 min。HRM熔解曲线条件为:60~97℃,每1℃读板20次。分别以福清山羊和努比亚黑山羊的背最长肌组织cDNA为模板,参考山羊IGF-1基因全长mRNA序列(GenBank No.KJ549851.1),利用Primer Premier 5.0软件设计引物(表1)扩增该基因CDS全长序列。