《表1 qRT-PCR引物》

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《血清miR-223及miR-155对新生儿肺炎的诊断价值研究》

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采用Trizol试剂提取两组新生儿治疗前、后血清总RNA，按照试剂盒说明书进行操作，使用分光光度计测定RNA浓度和纯度，1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。以RNA为模板，按照PrimeScript RT reagent试剂盒说明书进行逆转录反应，以cDNA为模板，参照SYBR Premix ExTaq试剂盒进行qRT-PCR反应。反应体系20.0μL:2×UltraSYBR mixture 10.0μL，cDNA模板（25ng/μL)2.0μL，上下游引物各2.0μL，ddH2O 4.0μL。反应条件：预变性95℃30s，变性95℃5s，退火60℃30s，延伸72℃20s，共40个循环。引物由大连宝生生物工程有限公司设计并合成，miR-223、miR-155均以U6作为内参基因。采用2-ΔΔCt方法计算两组新生儿血清中miR-223、miR-155相对表达水平。引物设计见表1。