《表1 LM毒力基因和血清学分型所用引物》

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《4株单核细胞增生李斯特菌分子特征分析》

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参照文献[8]合成李斯特菌毒力岛（prf A、act A、plc B、plc A、hly、hly2、mpl）及inl A、inl B基因引物，用PCR方法进行扩增。反应体系为50μL，包括Premix Taq 25μL，模板DNA 2μL，上、下游引物（20μmol/L）各1μL，dd H2O 21μL。反应条件为:95℃5 min；95℃30 s，58℃（prf A、act A、plc B）/57℃（plc A、hly、hly2）/60℃（inl A、inl B）/62℃（mpl） 45 s，72℃45 s，30个循环；72℃10 min。用多重PCR扩增血清型相关基因lmo0737、lmo1118、ORF2819、ORF2110、prs，进行血清分型[9]，反应条件为:94℃3 min；94℃40 s，53℃69 s，72℃69 s，35个循环；72℃7 min。PCR产物经15 g/L琼脂糖凝胶电泳观察，取阳性产物经3730型DNA测序仪进行Sanger双脱氧链终止法双向拼接测序，并与Gen Bank中的序列进行比对确证。测序工作均由上海生工公司完成。引物信息见表1。