《表1 不同SSR引物对189株稻瘟病菌单孢菌株的PCR扩增结果》

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《基于SSR序列的江西省不同生态地区稻瘟病菌遗传多样性分析》

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将1.2.1分离保存的稻瘟病菌菌株活化后，分别挑取适量菌丝接入PD液体培养基中，于120 r/min、28℃条件下摇培3～6 d，待菌丝体生长至一定量后用灭菌纱布过滤收集、烘干并于-20℃保存备用。将收集的菌丝体分装于2 mL Eppendorf管中，加2颗直径5 mm的灭菌碳钢珠后迅速加入65℃预热的CTAB提取液，磨样后利用植物基因组提取试剂盒参照说明书对供试稻瘟病菌基因组DNA进行提取，将提取的DNA于-20℃保存备用。选择童新建等（2012）报道的13对SSR引物KMS02、KMS20、SMS17、A5、D4、D5、G5、FG01、FG02、FG03、MS355、MS363、MS677对供试稻瘟病菌基因组DNA进行PCR扩增，引物均由北京奥科鼎盛生物科技有限公司合成（表1）。20μL反应体系：DNA模板1μL（≤200 ng）、0.2～0.4μmol/L正反向引物各1μL、2.5 mmol/L dNTP 0.5μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、10×Buffer（含Mg2+)2μL、ddH2O 14.3μL。反应程序：95℃预变性5 min；94℃变性30 s，55～57℃（按引物各自退火温度）退火1 min，72℃延伸60～90 s（根据片段大小而定），35个循环；72℃再延伸10 min。获得的PCR产物于4℃保存，经1%琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统紫外灯下显示特异性条带并拍照保存。