《表1 Real—time PCR使用引物序列表》

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《视网膜母细胞瘤结合蛋白在非小细胞肺癌中的差异性表达》

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（1）RNA提取并逆转录c DNA:以每50 mg冷冻新鲜组织加入1 ml Trizol RNA提取液，在匀浆器中将组织块磨成匀浆，使样品充分裂解后移入1.5 ml离心管，用Trizol试剂一步法提取细胞总RNA（按照说明书操作）。用核酸蛋白定量测定仪测RNA的浓度和纯度。按照逆转录试剂盒说明书将提取的总RNA逆转录合成c DNA。（2）引物设计及合成:应用Primer Premier 5.0软件设计RBBP6基因和内参Actin基因的引物，并利用NCBI网站上的Primer.BLAST进行查询比对，确定其为特异性序列（表1）。引物均由上海生工生物公司合成。（3）Real-time PCR检测:用实时荧光定量PCR仪（Light Cycler 480II）进行Real-time PCR反应。PCR反应条件:50℃2 min，95℃10 min，95℃15 s，60℃30 s（采集荧光信号），72℃30 s，共进行40个循环后72℃延伸5 min。测得RBBP6和Actin的表达。