《表1.Real-time PCR引物序列表》

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《花青素单一成分矢车菊-3-O-葡萄糖苷抑制B16-F10细胞增殖和迁移的机理》


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恒压200 V,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,待2×SDS上样缓冲液蓝带跑出胶外即可;蛋白转移,安装转移装置,其排列依次为海绵、纸、胶、膜、纸、海绵,将蛋白转移至PVDF膜,恒流150 mA 3 h;PVDF膜使用无水甲醇活化1 min,自然晾干10 min,再次活化30 s;TBS-T(pH 7.6含0.1%Tween-20)漂洗5 min;特异抗体1:1 000稀释后进行杂交,杂交溶液中加入5%脱脂奶粉以封闭非特异性杂交信号;TBS-T漂洗1次15 min,然后漂洗3次,每次5 min;辣根过氧化物酶标记的二抗杂交20~45 min,杂交液中含5%脱脂奶粉;TBS-T漂洗15 min,然后漂洗5次,每次5 min;利用ECL显色系统进行显色;X-ray胶片(Kodak)记录显色结果。