《表1 Real-time PCR引物序列》

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《桑黄多糖对人TLR4信号通路的激活作用研究》

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收集对数生长期的悬浮THP-1细胞，用含终浓度为5 ng·mL-（16）PMA的完全培养基调整成密度为5×105·mL-（16）的单细胞悬液，接种于6孔板，每孔2 mL，并置于37℃、5%CO2培养箱中诱导培养48 h。48 h后显微镜下可见THP-1细胞已完全贴壁，并伸出多个突起，表现为典型的巨噬细胞形态，可实施药物处理。各孔加入PPI药液，使终浓度分别为1，10，100μg·mL-1。设置培养基阴性对照组及100 ng·mL-1 LPS阳性对照组，并置于培养箱中继续培养6 h。药物处理结束后，用RNAiso plus提取总RNA，并用SuperScriptⅡ试剂盒逆转录成cDNA（所用引物序列见表1）。用CFX96Touch?Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad）扩增cDNA，用SYBR Premix Ex TaqⅡ检测m RNA含量，2-Ct法分析基因的相对表达量。