《表2 Hinf及Hamp基因引物序列》

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(1)引物设计。依据参考文献[8]与GeneBank数据库设计多重PCR基因引物,其中一对引物来自Hi特异具有长度多态性的染色体DNA片段Hinf,另一对引物来自外膜蛋白P1-Hamp。引物序列见表2。(2)多重PCR扩增体系。10 mmol/L dNTP 1μL,10×buffer 5μL,Mg+7μL,Taq DNA聚合酶0.5μL,10μmol/L上、下游引物各1μL,DNA模版5μL,无菌去离子水补足至50μL。扩增条件:94℃预变性7 min;94℃45 s,45℃45 s,72℃45 s循环30次;72℃延伸7 min。扩增产物经2.5%凝胶电泳40 min,扩增条带通过GIS ID分析软件进行分型。