《表2 基因的引物序列及参数》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《饲粮纤维对脂多糖刺激仔猪生长性能、器官相对重量及炎性细胞因子mRNA表达量的影响》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

心脏、胸腺、脾脏和肝脏称重后取样用于提取总RNA。总RNA提取按照试剂盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]说明书进行。RNA浓度通过Nanodrop 2000超微量分光光度计（Thermo公司）检测，纯度以OD260/280表示。cDNA合成按照反转录试剂盒（Toyobo公司）说明书进行，反转录后的cDNA于-20℃保存备用。采用实时荧光定量PCR法检测各组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达量，用Lightcycle 96 Real-time PCR仪（Roche公司）进行测定，反应荧光染料为SYBR GreenⅠ（Biosharp公司）。反应体系为10μL，由5μL qPCR M asterM ix、0.2μL上游引物、0.2μL下游引物、4.1μL RNase-free water、0.5μL cDNA组成。根据甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、IL-1β、IL-6和TNF-α的基因序列，用Primer premier 5.0设计引物，送交尚亚生物技术有限公司合成，基因的引物序列及参数见表2。循环参数:95℃30 s，95℃5 s，60℃30 s，40个循环。目的基因mRNA表达量采用Livak等[14]的2-ΔΔCt法计算，以GAPDH为内参基因。