《表1 荧光定量mRNA检测引物信息表》

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《β咔啉类生物碱对SGC-7901荷瘤裸鼠HGF/c-MET通路中FAK、PI3K、AKT信号通路影响》

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RT-PCR是以RNA为模板，经过逆转录反应（Reverse-TranseripPtion，RT）产生cDNA第一链，合成的引物序列片段长度（见表1），再以cDNA为模板进行PCR扩增，PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离并观察结果，用以检测目的基因的表达情况。PI3K的上游引物：TCAGTGAAGTGCCAGAGTGA，PI3K的下游引物：CCAAAAAGGTCCCGTCTGCT，AKT上游引物：CCGCCTGATCAAGTTCTCCT，AKT下游引物：TTCAGATGATCCATGCGGGG，FAK上游引物：CCGGTCTCTGGGCTACAATG，FAK下游引物：ACTCAGAAGGCAGCAGTGAC，GRB2上游引物：CAGTGGAATTAAAAAGGGTGGCA，GRB2下游引物：TTGGCGATGGCTTCCATTCT，建立20μL反应体系：2×RealStar green fast mixture with ROX10μL，cDNA 0.4μL，基因正反引物各0.4μL，RNase-free H2O 8.8μL。95℃，20 s预变性，40个循环（95℃3 s，60℃30 s)，4℃扩增。根据2-△△Ct方法分析各基因的相对表达量，即△Ct=Ct目的基因-CtAction；△△Ct=△Ct实验组-△Ct对照组。