《表1 荧光定量引物信息》

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《多巴胺受体拮抗剂对缢蛏多巴胺D2类受体的影响》


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从缢蛏发育转录组文库中筛选得到两个多巴胺D2类受体序列,分别为Sc Dop R2-1(comp297093_c1_seq1_35)和Sc Dop R2-2(comp299311_c2_seq1_75)(Niu et al.,2016) ,DNAMAN软件设计荧光定量引物,以18S作为内参基因(表1)。荧光定量所用荧光染料为SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNase H Plus)(宝生物工程(大连)有限公司) 。荧光定量PCR在CFX96 RealTime PCR Detection System仪器上进行。反应程序为两步法PCR扩增标准程序:样品体积(20μL);95℃30 s;95℃5 s,57℃30 s,40 cycle;95℃10 s;从65℃到95℃集信号,每个循环增加0.5℃,持续5 s获得解链温度。荧光定量反应体系为SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNase H Plus)10μL;上下游引物各0.6μL(10μmol/L);c DNA模板2μL;Rnase Free water 6.8μL。