《表3 正交试验设计因素及水平》

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《华山松SSR-PCR反应体系优化》

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从6个华山松种源的样品中各选一个无性系，以其基因组DNA为模板，利用初筛出的SSR引物进行SSR-PCR反应体系优化。以引物（10μmol/L）、d NTPs（10 mmol/L）、Taq DNA聚合酶（5 U/μL）和DNA模板（50 ng/mL）的用量为4个因素进行L16(44）正交试验（李春喜等，2008）。每个因素设4个水平（表3），2次重复，每重复16个组合。按照表4配制SSR-PCR反应体系，各体系均加入2.00μL10×PCR Buffer缓冲液，用ddH2O补足至20.00μL。扩增程序：94℃预变性5 min；94℃50 s，52℃90 s，72℃1 min，进行30个循环；72℃延伸10 min，扩增产物4℃保存。