《表1 实时PCR引物序列》

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《一种产后小鼠束缚应激模型的造模方法以及束缚装置的制作》


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采用逆转录实时聚合酶链式反应(RT-qPCR)的方法测定胃内ghrelin,5-HT2b受体mRNA表达水平和下丘脑内ghrelin,5-HT2c受体的mRNA水平。使用RN easy Mini Kit(Qiagen,Hilden,Germany)从样本组织中分离出总RNA,利用Improm-IITM逆转录系统(Promega,Madison,WI,USA)合成cDNA。使用表1列出的引物和QuantiFast SYBR Green RT-PCR(Roche,Swiss)试剂盒进行qPCR分析。循环参数设计在95℃初始化5 min,然后在95℃下10 s为周期进行连续40个循环的变性、延伸、扩增,最后在60℃退火30 s。根据其熔解曲线,以GAPDH基因作内参基因,使用2-ΔΔCt方法测定相对mRNA表达。