《表3 方案三不同染色结果》

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《牛体外受精囊胚双重染色方法的优化》

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注:PI*溶解在0.5%Triton X-100中。下同。

对Hoechst33342、Triton X-100、PI不同浓度及处理时间的牛囊胚双重染色结果见表3。按照100μg/m L PI中染色30 s、50μg/m L Hoechst33342中染色15 min的方法进行染色，囊胚细胞基本上全部染为蓝色，染色结果见图3I；调整染色方法为5μg/m L Hoechst33342中染色20 min、5μg/m L PI中染色20 s，基本上将ICM与TE细胞分别染为蓝色与红色，但染色效果不稳定，见图3J；将Hoechst33342浓度调整为20μg/m L，染色时间调为5 min，5μg/m L PI中染色20 s，将ICM与TE细胞分别染为蓝色与红色，染色效果见图3K。对调整后的方案进行统计，结果见表4。囊胚细胞总数与Hoechst33342染色结果无显著性差异（P>0.05），ICM与囊胚细胞总数的比值为0.338 2，接近0.33。染色时间在5 min左右。说明此改进的方法基本上达到了牛囊胚快速双重染色的目的。