《表1 PCR鉴定相关引物》

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《小鼠Nudt9基因原核载体的构建及其生物信息学分析》

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在原引物对的5'端添加酶切位点及保护碱基，PCR扩增得到小鼠Nudt9基因条带，然后对条带进行回收纯化。纯化后的产物与pET-28a（+）载体同时进行双酶切，及纯化回收。酶切产物必须纯化回收后方可进行连接，使用T4 DNA Ligase置于4℃进行过夜连接。再进一步的转化及菌群扩增，提取质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定。将目的基因引物对与载体引物对进行组合PCR鉴定，分别为Nudt9 Forward与Nudt9 Reverse、T7 promoter与T7 terminator、Nudt9 Forward与T7 terminator、Nudt9 Reverse与T7promoter。PCR鉴定后，在扩大菌群提取进行酶切鉴定，分别为重组质粒双酶切及重组质粒单酶切，完成后再送生物公司进行测序，并根据正确的测序序列绘制重组pET28a-Nudt9图谱。PCR引物序列见表1。