《表1 LAMP-LFD引物和探针序列》

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《环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测草鱼呼肠孤病毒方法的建立》

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根据NCBI Genebank的草鱼呼肠孤病毒S8（登录号:HQ231204）片段，通过序列比对后，选择高保守部分，通过Primer explorer V5（http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html）在线软件设计3对特异性LAMP引物（外引物GCRV-F3和GCRV-B3、内引物GCRV-FIP和GCRV-BIP、环引物GCRV-LF和GCRV-LB）用于LAMP反应；同时设计一条可与LAMP产物进行特异性杂交的DNA探针GCRV-HP（见表1，图1），用于LFD检测。其中，内引物GCRV-FIP的5′端进行BIO标记，探针GCRV-HP的5′端进行FAM标记（表1），上述引物和探针由生工生物（上海）股份有限公司合成。另外，GCRV-F3和GCRV-B3同时作为荧光定量PCR扩增的上游引物及下游引物（表1）。