《表1 PCR引物序列:逍遥散改善卵巢切除大鼠脂代谢异常和脂肪性肝炎的作用机制》

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《逍遥散改善卵巢切除大鼠脂代谢异常和脂肪性肝炎的作用机制》


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mRNA表达用trizol试剂从肝脏组织中提取细胞总RNA,细胞总RNA 1μL再加上Prime Script TM Master Mix 4μL和RNAase-free 15μL双蒸水配置成反转录反应液,进行反转录反应生成反义cDNA模板,条件为37℃15 min,85℃5 s,4℃10 min,最后用5μL SYBR Green Mix,2μL cDNA模板,上下游引物(10μmol·L-1)等配置混合液,PCR仪扩增所需cDNA。PCR扩增条件为95℃5 s,1次循环,95℃5 s,60℃31 s,40次循环。熔解条件为95℃15 s,60℃30 s,95℃15 s。最后通过2-ΔΔCt计算各mRNA相对表达量。引物序列由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,见表1。