《表2 RT-PCR引物：长双歧杆菌BBMN68寡糖利用预测与验证》

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《长双歧杆菌BBMN68寡糖利用预测与验证》

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引物的设计、合成与实时荧光定量PCR：利用NCBI数据库中PRIMER BLAST在线引物设计软件设计引物，并对选自文献中的引物进行比对验证。引物由上海英骏生物技术有限公司合成（表3）。PCR反应体系25μL:c DNA模板1μL，上下游引物各1μL，SYBR Green I Real-time PCRMaster Mix 12.5μL，dd H2O 9.5μL。反应条件：95℃预变性10 s，95℃变性5 s，61℃退火延伸31s，45个循环。相对表达量计算公式：在以葡萄糖为唯一碳源的半合成培养基中BBMN68基因表达量作为对照组，在以其它寡糖为唯一碳源的半合成培养基中其基因表达量为处理组。CT目的基因指BBMN68中糖苷水解酶基因拷贝数，CT内参基因指BBMN6816S rRNA拷贝数。每个目标基因进行3个生物重复。