《表1 富硒酵母的酶解提取液以及残渣中含有的硒成分》

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《高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定富硒酵母中硒》

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通过研究发现，经超声0.5 h破碎之后，提取液中的蛋白量比较稳定且不会升高[3，4]，为排除蛋白酶溶解的影响，可以将提取液分离后分别加入4 mL缓冲液于残渣中，分4次进行0.5 h超声，在第2次超声过程中所提取的总蛋白量为上一次的20%。本文所选取的样品提取液用量在超声0.5 h后需要继续超声，此时蛋白质容量有一定程度的上升，这可能是由于硒细胞未完全破碎导致的。由于考虑超声波的时间较短，能够有效防止提取液中含硒分子转化，因此，本文选取0.5 h作为超声破碎的时间，在超声时需要将冰样品置于冰上，防止在超声过程中出现分子转化，超声破碎后在蛋白酶水解下能够水解细胞壁，将蛋白质水解释放肽链，结合的富硒分子进行解离之后，酶提取液和残渣中硒含量详见表1。由表1可知，提取率达80.97%，除由于细胞没有完全破碎导致分析存在误差外，硒没有被全部提取出来，主要是以多糖形式存在于细胞壁中和提取残渣中，在酶解的过程中加入搅拌可显著提高硒的提取率。虽然通过酶解法能够破坏样品中的蛋白质，但其通过膳食结构进入人体之后，蛋白质会通过水解形成氨基酸，再次被人体吸收。因此，通过酶解法进行新产品提取是比较合理的技术。