《表2 PCR扩增引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《传统大豆发酵食品中纳豆芽孢杆菌的分离及纳豆发酵》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

注：16S rRNA的上、下游引物为27F、1492R；ITS的上下游引物为L516SF、L523SR。

提取所筛菌株的基因组D N A作为P C R模板。合成1 6 S r R N A和I T S引物[1 5]（由B i o s u n e公司合成），引物序列如表2所示；PCR采用25μL体系：10×PCR Buffer 2.2μL；dNTPs（2.5 mmol/L）2.5μL；d d H2O 1 7.5μL；上下游引物（1 0μmol/L）分别为0.5μL；DNA模板1μL；Taq酶0.5μL。16S rRNA的PCR设定程序为：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸75 s，共30个循环；ITS的PCR设定程序为：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30个循环；使用无菌的ddH2O作为阴性对照。PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，经纯化回收后交由Biosune公司测序。使用NCBI数据库的BLAST程序对测序的16S rRNA、ITS基因序列进行同源性比对，并用MEGA 7.0软件通过Neighbor-Joining法构建系统发育树[18]。