《表3 细胞因子的Real-time PCR引物》

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《RIG-I敲除293T细胞系的建立及其对B型流感病毒复制的影响》

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将生长状态良好的WT及RIG-I-/-293T细胞铺至12孔板，待细胞密度达到100%时感染IBV，MOI为0.5。分别于感染后0、4、8、12 h取样，每孔加入Trizol Reagent 500μL裂解细胞并进行RNA提取及反转录。反转录体系为：RNA模板5μL，10 mmol/L dNTPs 1μL，Oligo（dT）1μL，RRI 1μL，MLV反转录酶1μL，10×缓冲液2μL，ddH2O 9μL；反应条件为：RNA模板与Oligo（dT）混匀在70℃下作用5 min，冰浴5 min，再加入其他成分，42℃作用60 min，80℃条件下10 min即可。将所得DNA模板置于-20℃冰箱中冻存备用。Real-time qPCR的详细操作步骤按SYBR?Premix Ex TaqTM kit说明书进行，所用引物如表3所示。