《表1 本研究所用引物:家蚕抗性品系NC99R抗BmNPV作用机制分析》
DZ和NC99R品系分别感染BmNPV 0、12、24、48、72、96 h后,进行研磨分装,总RNA使用TRIzol Reagent(Invitrogen)提取,检测提取成功后,使用反转录试剂盒(Promega)合成cDNA,保存于-20℃备用。按照5μL i TaqTM Universal SYBR?Green Supermix(Bio-Rad)定量试剂,3.6μL dH2O,0.2μL Primer F/R,1μL cDNA模板进行混匀,混匀后加入定量板的孔中,即每个反应重复3次。将分装好的反应产物连同定量PCR板4℃、3 000×g离心3 min后,放置在定量PCR仪中,反应程序为:95℃10 min;95℃5 s,60℃30 s,循环40次,65℃以0.5℃每5 s梯度增长至95℃。以家蚕真核翻译起始因子4A(探针号:sw22934)为内参基因,相对定量PCR的数据处理用2-△CT法。本研究所用引物见表1。
图表编号 | XD00122737900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.01.25 |
作者 | 董战旗、雷雪蛟、秦琪、张新铃、唐亮、石美宁、潘敏慧 |
绘制单位 | 西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室、西南大学农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室、西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室、西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室、西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室、广西壮族自治区蚕业技术推广总站、广西壮族自治区蚕业技术推广总站、西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室、西南大学农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室 |
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