《表2 本研究所用siRNA序列与NC序列》

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《中国对虾V-ATPase c亚基基因的克隆及其在高pH胁迫下的表达分析》

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根据克隆获得的FcVHA-c基因cDNA序列，设计3个干扰靶点，分别编号为:c-1，c-2，c-3（表2）。本实验所用的siRNA均由生工生物工程（上海）用化学方法进行合成。设置预实验，从中挑选出干扰效果最佳的siRNA靶点。本实验以注射NC作为对照组，分别注射c-1，c-2，c-3作为干扰组，每组3个平行，每个平行10尾虾，根据体重注射干扰试剂，注射量为1μg/g，注射部位为第二腹节，肌肉注射。注射后第12、24、48小时，每组随机挑选3尾虾取鳃，立即保存于液氮中。利用荧光定量法检测注射干扰试剂后FcVHA-c基因在鳃中的表达变化，并以此为根据，挑选的最佳干扰靶点。根据预实验结果和pH胁迫实验，干扰实验设置2个实验组:以注射NC并进行pH8.8胁迫作为对照组，以注射最佳干扰靶点并进行pH8.8胁迫作为干扰组。每组设置3个平行，每个平行10尾虾，统计实验开始后0—48 h中国对虾死亡率。实验开始后2—3 h校正pH值。