《表2 SSR引物名称和序列》

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《基于不结球白菜转录组EST-SSR标记开发及多态性分析》

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重复基序括号外数字为其重复次数

利用Primer Premier 3.0对筛选出的SSR位点进行EST-SSR引物批量设计，以不同重复基元类型设计的引物中随机挑选40对（表2），由北京六合华大基因科技有限公司合成。采用CTAB（cetyl-trimethyl-ammol/lonium bromide）法提取DNA（何宇宁，2017）。先用40对引物对92份不结球白菜种质资源中随机10份的DNA混样进行初步筛选，当引物可以获得目的大小的条带时，再分别用92份不结球白菜样品逐个扩增，进行多态性引物的筛选。参考时小东（2016）方法进行PCR扩增，扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性45 s，退火温度及对应的延伸时间分别为：GS1为58℃90 s，GS2为57℃90 s，共35个循环；72℃延伸10 min，结束后4℃保存。分别利用1.0%琼脂糖凝胶和8.0%非变性聚丙烯酰胺凝胶检测扩增产物。琼脂糖凝胶在凝胶成像仪上观察、拍照并读带。