《表1 ScTLP2和ScTLP3基因的qRT-PCR引物》

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《甘蔗类甜蛋白基因ScTLP2和ScTLP3的生物信息学分析及表达》

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使用Primer Premier 5.0软件设计目标基因的定量引物qScTLP2-F/R和qScTLP3-F/R（表1）。内参基因为磷酸甘油醛脱氢酶基因（glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase，GAPDH）。通过qRT-PCR方法检测目标基因在甘蔗不同组织和不同时间点黑穗病菌胁迫样品中的相对表达量。qRT-PCR反应体系参照SYBR Green PCR Master Mix Kit（Rox）说明书配置，qRT-PCR扩增程序为50℃反应2 min、95℃反应10 min、95℃反应15 s且60℃反应1 min（40个循环）。熔解曲线收集程序为95℃反应15 s、60℃反应1 min、95℃反应15 s、60℃反应15 s。每个qRT-PCR反应设置3次重复。目标基因的相对表达量采用2-ΔΔCt法进行计算（Livak and Schmittgen，2001），同时用DPS9.50软件分析数据的显著性水平，并用软件Origin8.0绘图。