《表1 F9基因不同外显子扩增引物信息》

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《凝血因子Ⅸ基因新发错义突变致乙型血友病一例家系分析》

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分别针对F9基因的外显子及邻近内含子区域设计引物。引物参照Paez等[1]和Lynch等[2]设计，扩增片段为265-795bp，引物由上海Invitrogen公司合成，引物序列及相关信息见表1。首轮PCR总反应体系为25μl，包括模板DNA2μl，2×PCR mix buffer 12.5μl，终浓度为5μmol/L的上、下游引物各2μl，ddH2O补足至25μl。循环参数：95℃预变性5min；95℃30s，57℃30s，72℃1min，共35个循环；72℃延伸5min。PCR产物经2g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定，采用凝胶成像系统拍照成像，验证PCR扩增产物是否为目的片段。