《表1 JK基因第4—11外显子扩增引物序列》

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《Kidd血型基因多态性位点连锁突变及作为快速分型分子标记的探讨》

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首先，采用DNA提取试剂盒提取全血DNA，操作严格按照MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I试剂盒说明书进行。测定所提取的DNA浓度，低于2ng/μL的DNA不能用于以下实验。PCR扩增Jk基因4—11外显子的引物设计参考文献[12][13]，引物序列见表1。扩增反应体系10μL包含200 ng DNA，10 pmol引物，d NTP 20μmol，0.5 U Taq Polymerase，1×PCR Buffer；扩增程序:96℃7 min；96℃30 s，58℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃7 min；4℃保存。2%的琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物。随后，用exonucleaseⅠ和alkaline phosphatase两种酶纯化扩增产物。纯化体系:10μL扩增产物，exonucleaseⅠ0.25μl，alkaline phosphatase 1μL，Fast AP Buffer 3μl。纯化程序:37℃45 min，85℃15 min，4℃保存。纯化完成后的产物用于Sanger测序。