《表1 去泛素化酶抑制剂：化学拔尖学生培养课程——化学生物学实验课程建设与实践》

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《化学拔尖学生培养课程——化学生物学实验课程建设与实践》

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在“蛋白质连接反应与蛋白质半合成”实验中，学生通过内含肽蛋白自剪切原理获取泛素（Ub）-酰肼蛋白Ub（1-75）-NHNH2，再利用表达蛋白连接技术将生物表达蛋白与化学合成的Glycine-AMC进行连接，从而得到目标蛋白质Ub-AMC。作为检测去泛素化酶（DUB）活性的分子工具，Ub-AMC能够被DUBs水解，产生与DUBs活性相关的荧光信号AMC，从而可以被应用于DUBs抑制剂的高通量筛选[7，8]。现有教材中，学生在完成Ub-AMC底物合成后，会运用泛素羧基端水解酶（UCH）及酶标仪来对所合成产物Ub-AMC的活性进行鉴定[9]。通过查阅相关DUB抑制剂，我们设计加入针对UCH的商品化抑制剂TCID[10]，比较在相同抑制剂浓度下，TCID与广谱DUB抑制剂PR619[11]对Ub-AMC的活性影响（表1）。学生利用自己所合成的泛素探针表征DUB抑制剂，可以更好地理解去泛素化酶的工作原理，从而衔接科研进展与实验教学。