《链霉菌遗传操作实验手册》求取 ⇩

1．生物材料和噬菌体的制备链霉菌琼脂平板培养物1

链霉菌孢子悬液的制备1

用链霉菌孢子悬液涂布平板4

链霉菌菌丝体的生长4

链霉菌孢子的预萌发5

用链霉菌菌丝体提取“总”DNA7

变青链霉菌66和天蓝色链霉菌A3(2)原生质体的制备8

用苯酚／氯仿抽提法纯化核酸89

链霉菌噬菌体的纯化10

单个链霉菌噬菌斑的分离纯化12

制备高效价链霉菌噬菌体原液13

分离新的链霉菌噬菌体14

φC31溶源菌的制备16

链霉菌菌株和噬菌体的贮存18

培养大肠杆菌以提取质粒20

大肠杆菌感受态细胞的制备21

2．链霉菌体内遗传学链霉菌的诱变23

链霉菌孢子的紫外线诱变25

8－甲氧基补骨脂素存在时近紫外线对链霉菌孢子的诱变27

N－甲基－N′－硝基－N－亚硝基胍（NTG）对链霉菌孢子的诱变28

通过杂交和原生质体融合所进行的遗传分析29

杂交的建立、收获和平板的涂布31

重组子基因型的鉴定32

杂交试验结果的计算35

用“4×4”步骤制作一个链霉菌新菌种的基因连锁图36

用单一选择定位新的标记41

平板杂交43

与变青链霉菌杂交后通过麻点Pock的形成检测接合性质粒43

原生质体融合46

通过原生质体融合的遗传分析49

链霉菌总DNA的分离方法50

3．染色体、质粒和噬菌体DNA的制备使用苯酚和SDS的注意事项50

链霉菌总DNA分离的方法（程序1）51

用氯化铯梯度离心提取链霉菌总DNA（程序2）54

链霉菌总DNA的分离（程序3）55

链霉菌总DNA的少量快速分离（程序4）57

分离链霉菌质粒DNA的程序59

利用中性溶菌从链霉菌中大量制备质粒DNA（程序1）59

碱性溶菌法提取链霉菌或大肠杆菌质粒（程序2）62

SCP2衍生质粒DNA的少量制备（程序3）68

链霉菌噬菌体DNA的大量制备69

少量链霉菌噬菌体DNA的制备72

4．转化和转染链霉菌的转化和转染76

用质粒DNA转化链霉菌原生质体（初始方法）78

用质粒DNA转化链霉菌的原生质体78

用质粒DNA转化链霉菌的原生质体（小规模快速方法）80

转化后含质粒链霉菌菌株的识别和挑选81

链霉菌原生质体的转染84

制备带正电荷的无DNA脂质体（脂质体上清液）用于转染试验86

质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的转化87

5．DNA体外操作DNA的沉淀89

从用染料－浮力密度梯度离心法制备的DNA中去除溴乙锭和氯化铯91

DNA和RNA的定量测定92

DNA的限制性内切酶酶解94

DNA的琼脂糖凝胶电泳98

琼脂糖凝胶电泳中DNA的标样大小99

20×20cm琼脂糖凝胶的制备102

在5.1×7.6cm小玻璃板上制备微型胶103

凝胶电泳样品的制备103

凝胶摄影104

其它有关的试验操作104

DNA丙烯酰胺凝胶电泳104

从凝胶中回收DNA片段106

DNA用蔗糖梯度离心法大小分部108

DNA的连接110

用碱性磷酸酶处理去除DNA5′端磷酸基112

6．DNA基因克隆：载体的选择和策略有关基因克隆的基本考虑114

通过质粒载体的基因克隆116

利用噬菌体φC31作为载体的基因克隆119

制备克隆文库的统计学考虑127

7．同位素标记DNA操作技术序言129

32P标记材料的操作须知129

DNA的切口移位标记法129

DNA从琼脂糖凝胶向硝酸纤维素滤纸的转移132

DNA从链霉菌菌落到硝酸纤维素滤纸的转移135

将链霉菌噬菌体DNA转移到硝酸纤维素滤纸上137

在硝酸纤维素滤纸上进行DNA-DNA原位杂交138

硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影142

用T4多核苷酸激酶进行DNA5′端的标记143

填补3′内凹未端标记双链DNA145

使用未端转移酶进行3′端的标记148

链霉菌DNA序列分析提要149

8．RNA操作技术链霉菌RNA的分离152

变性RNA向硝酸纤维素滤纸的转移及与32P标记DNA的杂交157

点样原位杂交分析法159

DNA转录区的S1核酸酶定位160

附录培养基和图琼脂培养基165

液体培养基170

生长因子补充物173

缓冲液173

天蓝色链霉菌、变青链霉菌和小小链霉菌的菌株186

天蓝色链霉菌A3(2)的衍生菌株187

天蓝色链霉菌A3(2)菌株的遗传标记188

天蓝色链霉菌A3(2)菌株的连锁图193

变青链霉菌66菌株194

变青链霉菌10个遗传标记的连锁图194

小小链霉菌ATCC12434菌株194

SLP1.2的限制性酶切和功能图谱195

有关质粒和噬菌体φC31以及由它们衍生而来的载体的图谱及其所编码的信息195

PIJ101的限制性酶切和功能图谱196

SCP2*的限制性酶切和功能图谱197

载体中标记片段的部分限制性酶切图谱198

六个标记片段限制性图谱199

标记片段限制性图谱的图距200

aph、tsr、vph基因的核苷酸顺序201

一些链霉菌质粒载体209

质粒载体的限制性内切酶图240

φC31的限制性内切酶图谱241

φC31衍生载体的谱系241

参考文献245

新增补的参考文献268