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第一节 限制性内切酶1

第一章 DNA重组常用酶 王贤舜1

第二节 DNA重组常用的其他酶类5

第二章 DNA重组常用载体 王培之15

第一节 质粒15

一、大肠杆菌质粒载体16

二、枯草杆菌质粒载体24

三、酵母细胞的基因克隆载体29

四、质粒DNA的快速纯化和检测31

第二节 λ噬菌体载体33

第三节 cosmid载体35

第四节 单链噬菌体载体35

一、植物的克隆载体40

第五节 高等真核细胞的克隆载体40

二、动物细胞的克隆载体41

第三章 凝胶电泳 王贤舜44

第一节 琼脂糖凝胶电泳44

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳48

第四章 DNA的分离纯化 刘震乾52

第一节 细菌染色体DNA的纯化52

第二节 质粒DNA的提取53

一、质粒DNA的小量快速提取53

二、质粒DNA的大量提取和纯化55

第三节 λ噬菌体DNA的制备59

一、λ噬菌体的增殖与纯化59

三、λDNA的小量快速提取61

二、λDNA的大量制备61

第四节 从凝胶中回收和纯化DNA62

第五章 DNA的切割和连接 刘震乾66

第一节 DNA的切割66

第六章 核酸分子杂交技术 王申五　刘震乾66

第二节 DNA片段的连接67

第三节 DNA片段的末端修饰69

第一节 同位素标记探针的制备74

一、缺口平移技术74

二、核酸的125Ⅰ化学标记77

第二节 非同位素标记探针的制备78

第三节 以SP6重组体制备RNA探针82

第四节 Southern印迹法杂交技术83

第五节 Northern印迹杂交87

第六节 斑点杂交89

一、DNA斑点杂交89

二、RNA斑点杂交91

第七节 菌落原位杂交鉴定重组质粒91

第八节 噬菌斑原位杂交鉴定重组噬菌体92

第七章 真核生物染色体基因库的构建 王玉珍95

第一节 载体DNA的制备95

第二节 插入DNA的制备97

一、真核高分子量DNA的分离97

二、高分子量DNA部分酶解及分离纯化98

第三节 体外包装提取物的制备100

第四节 DNA连接和体外包装101

第五节 基因文库的扩增、分装及保存103

第六节 从基因库中筛选目的基因105

第一节 mRNA的纯化107

第八章 真核生物mRNA的纯化和cDNA文库的构建 徐洵107

一、细胞总RNA的制备108

二、从组织中提取总RNA109

三、多聚(A)+RNA的提纯111

第二节 cDNA文库的构建113

一、cDNA链的合成113

二、cDNA的分子克隆119

附：mRNA的体外翻译124

一、兔网织红细胞裂解物体外翻译系统124

二、麦胚抽提液无细胞体外翻译系统127

第一节 双脱氧-M13系统DNA序列测定法132

一、由M13克隆系统制备单链模板DNA132

第九章 DNA序列测定 刘震乾132

二、双脱氧链末端终止法序列测定137

第二节 化学裂解法142

一、DNA片段末端标记142

二、标记末端的分离146

三、化学裂解反应147

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影151

第十章 重组DNA顺序在原核和真核细胞中的表达 周强153

第一节 重组DNA顺序导入原核和真核细胞的方法153

一、大肠杆菌的转化和噬菌体λDNA的导入153

二、酵母细胞的转化155

三、动物细胞的转化157

四、接受外源基因的哺乳动物细胞的筛选161

一、大细胞技术(Maxicells)162

第二节 重组DNA表达产物的检测162

二、紫外线照射细胞的噬菌体感染技术163

三、免疫沉淀技术检测表达产物164

第十一章 用体外诱变方法构建突变体 崔涛167

第一节 缺失突变体167

一、简单的缺失突变体构建168

二、精细缺失突变体构建170

第二节 插入突变173

一、位点特异性插入174

二、随机插入175

第三节 寡聚核苷酸定点诱变176

一、制备DNA模板177

二、突变的寡聚核苷酸片段特异性测定178

三、环状异源双链DNA的体外合成179

四、富集环状异源双链DNA180

第四节 盒式突变(casstte mutagenesis)181

一、简并性寡聚核苷酸的设计和合成182

二、通过互为引物的寡聚核苷酸合成双链DNA183

三、寡聚核苷酸片段克隆184

第五节 转化185

第六节 筛选突变体187

附录193

一、常用实验技术193

二、有潜在危险的材料与试剂的安全使用199

三、常用名词缩写和简称200

四、常用试剂和培养基的配制202

五、常用实验材料及有关厂家和公司地址206