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目 录1

前言1

绪论3

实验方法六 由携带Tn10的菌株选择Tets突变体 （74

第一部分实 验8

实验一插入Tn10的营养缺陷型的分离8

实验二特殊基因附近Tn10插入突变体的分离15

实验三Tn10引起的缺失突变21

实验四局部诱变26

离和鉴定31

实验五通过羟胺形成的λ噬菌体点突变体的分31

实验六λαmp缺失突变体的分离34

实验七缺失定位36

实验八通过互补作用选择λgt—his克隆39

实验九噬菌斑杂交44

实验十凝胶杂交48

实验十一DNA的电子显微镜观察50

实验十二从λ载体到质粒载体的次级克隆52

实验十三Tn10介导的F′ts lac+插入54

二、噬菌体划线分离57

第二部分实验方法57

一、寄主细胞57

实验方法一噬菌体的噬菌斑纯化57

三、挑选噬菌斑58

四、噬菌体的滴度测定58

实验方法二噬菌体原液的制备61

一、寄主细胞61

二、铺平板的步骤61

三、平板收集61

实验方法三制备P22转导噬菌体的快速方法64

一、标准杂交65

实验方法四噬菌体的纯化66

一、CsC1区域密度梯度离心66

二、平衡梯度离心67

实验方法五Tn 10转位69

一、从NK337菌株产生缺陷性转导噬菌体69

二、加噬菌体尾部到P22头部70

三、转位转导71

因的λ噬菌体76

实验方法七红色平板用于试验具有β-内酰胺酶功能基76

实验方法八羟胺诱变78

一、噬菌体或克隆基因（如β-内酰胺酶基因）中突变体的78

分离78

二、通过并发转导进行局部诱变79

实验方法九λ缺失突变体的选择82

实验方法十噬菌体的重组和体内互补试验85

二、噬菌体生长的互补试验85

三、突变噬菌体（λ或P22）互补作用的点滴试验86

实验方法十一 λ噬菌体DNA的提取90

一、甲酰胺法90

二、λDNA的快速分离92

三、用可被温度诱导的S am 7溶源菌制备λDNA95

四、λDNA的解链96

一、大量E、coli质粒DNA的分离98

实验方法十二质粒DNA和细菌DNA的分离98

二、少量质粒DNA和细菌DNA的分离101

（一）从菌落或液体培养物中快速分离质粒DNA和（或）101

细菌DNA101

（二）从10毫升培养物中快速分离质粒DNA103

实验方法十三从DNA氯化铯溶液中除去溴化乙锭105

一、DNA切割107

二、以T4DNA连接酶进行共价连接107

实验方法十四λgt杂种的组建107

实验方法十五体外包装λDNA为病毒颗粒110

一、包装反应110

二、诱导过的包装细胞的制备110

实验方法十六λDNA的转染113

一、细胞培养113

二、细胞制备113

三、DNA感染113

四、细胞保藏114

体中116

实验方法十七将DNA片段次级克隆到E、coli质粒载116

实验方法十八质粒DNA的转化118

实验方法十九E、coli中杂种噬菌体的互补作用120

一、由杂种库进行裂解选择120

二、杂种库中双溶源菌的选择121

实验方法二十琼脂糖凝胶电泳125

一、琼脂糖凝胶125

二、琼脂糖凝胶中DNA的染色129

三、含有核酸的凝胶的照相130

四、乙二醛凝胶131

实验方法二十一 DNA转移到硝酸纤维素或重氮134

滤膜上134

一、从琼脂糖凝胶上转移134

二、从λ噬菌体的噬菌斑上转移136

三、从细菌菌落上转移139

实验方法二十二缺口转译α-32P标记DNA141

一、反应141

三、脱氧核糖核酸酶142

二、脱氧核苷三磷酸（dNTP）142

四、32P参入DNA的检测……………………………………（142 ）143

五、标记DNA的回收143

六、附注144

实验方法二十三 与固体支持物上的DNA或RNA145

的杂交145

实验方法二十四 固体支持物上32P的放射自显影149

实验方法二十五从琼脂糖凝胶中回收DNA150

一、玻璃纤维过滤法150

三、将DNA电泳洗脱至羟基磷灰石中152

二、KI平衡密度梯度离心法152

实验方法二十六 用溴化乙锭快速测定DNA154

的浓度154

一、琼脂糖平板法154

二、塑料膜－环法154

实验方法二十七DNA的电子显微镜观察156

一、水样法156

二、甲酰胺法157

二、异源双链的电镜观察159

实验方法二十八形成异源双链的一般方法159

一、异源双链的形成159

实验方法二十九 由λcI 857Sam 7溶源菌制备不同组161

分的酶161

一、一般程序161

二、从E、coli 594裂解液中纯化DNA聚合酶Ⅰ162

三、从E、colill50裂解液中纯化T4DNA连接酶164

第三部分附 录166

附录一培养基、药物浓度和补充营养物166

一、培养基166

二、药物浓度171

三、补充营养物174

附录二营养缺陷型的鉴别（生长谱测定）175

附录三细菌、噬菌体和DNA的保藏177

一、细菌和噬菌体的保藏方法177

二、细菌和噬菌体保藏的操作步骤177

三、DNA的保存178

一、缓冲液181

附录四缓冲液和溶液浓度181

二、溶液浓度183

附录五透析袋的制备185

附录六度量衡186

一、微升体积的测量186

二、DNA的解链温度（Tm）187

三、离心澄清时间188

四、单位189

二、限制性核酸内切酶的性质190

附录七限制性核酸内切酶的切割190

一、方法190

附录八λ载体的容量194

附录九限制性图谱195

一、λ图谱和λ载体195

二、pBR322图谱206

附录十组氨酸缺失图208

附录十一栅格式样209

附录十二菌株目录211