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序1

緒言4

菌株表9

第一部份：實驗15

1.分离有營養缺陷的Tn10插入突變種16

2.位置於特定基因近旁的Tn10插入因子的分離方法21

3.Tn10所導致的缺失突變作用26

4.局部致變作用30

5.分離與刻畫由羥胺導致的λ點突變噬菌體34

6.λamp噬菌體缺失突變種的分离37

7.缺失突變的圖譜39

8.剎用互補作用篩選λgt—his營養系42

9.溶菌斑雜合法47

10.膠體雜合法51

11.利用電子顯微鏡观察DNA53

12.λ噬菌體內營養系DNA轉移至質體上的方法55

13.剎用Tn10引導F’t8lac＋質體插入細菌的染色體中57

第二部份：程序61

1.噬菌體溶菌斑的純化62

Ⅰ菌株62

Ⅱ 下劃線法；上劃線法62

Ⅲ 挑選溶液斑63

Ⅳ 測定噬菌體的數目63

2.噬菌體母液的製備66

Ⅰ菌株66

Ⅱ 接種菌體與噬菌體於培養皿上的程序66

Ⅲ 收集噬菌體66

3.備P22轉運噬菌體的簡易方法69

4.噬菌體的純化71

Ⅰ利用BeckmanSW50.1廻轉器進行氣化銫階段密度梯度離心實验71

Ⅱ 使用SW50.1廻轉器進行氣化銫衡定密度梯度離心實驗72

5.Tn10的移位75

Ⅰ制造NK337菌株的有瑕疵轉運噬菌體75

Ⅱ 添加P22的尾部於其頭部76

Ⅲ 移位因子的轉運77

6.由攜帶Tn10的菌株中篩選Tets突變種80

7.利用紅色培養基測定攜帶β—乳胺酶基因的λ噬菌體82

8.羥胺的致變作用84

Ⅰ噬菌體或者營養系基因突變種的分離84

Ⅱ 利用噬菌體共同轉運的技術達成局部致變的效果85

9.λ缺失突變種的篩選88

10.在活體內進行噬菌體的重組與互補實臉90

Ⅰ噬菌體標準的交配法90

Ⅱ 利用噬菌體的生長能力測定互補作用91

Ⅲ 利用斑點測驗法測定噬菌體（λ或者P22）突變種的互補作用91

11.抽取λ噬菌體DNA96

Ⅰ甲醯胺法96

Ⅱ λDNA的快速分離98

Ⅲ 剎用可由溫度誘發噬菌體的Sam7潛溶菌制造DNA101Ⅳ λDNA的分股102

12.質體以及細菌DNA的分離104

Ⅰ大腸菌質體DNA的大量分離104

ⅡA 利用菌落或菌液快速地分離質體DNA或者質體及菌體DNA的程序107

ⅡB 快速分離10m1菌液所含的質體DNA109

13.排除DNA—CsC1溶液中的EthidiumBromide111

14.造λgt的雜種113

ⅠDNA的斷裂113

Ⅱ 利用T4DNA接合酶使DNA共价連接113

15.λDNA於活體外裝入噬菌體116

Ⅰ裝入程序116

Ⅱ 含有熱誘發噬菌體的菌液的製備116

16.利用λDNA轉化感染菌體120

Ⅰ生長菌體120

Ⅱ 處理菌體120

Ⅲ DNA的轉化感染120

Ⅳ 菌體的貯存121

17.利用大腸菌質體為媒介製造營養系DNA123

18.質體DNA的轉化作用125

19.雜種噬菌體在大腸菌體內的互補作用127

Ⅰ利用雜種噬菌體溶裂菌體的現象測定互補作用127

Ⅱ 利用雜種噬菌體與帮手噬菌體雙重潛溶的現象測定互補作用128

20.瓊脂糖膠體電泳132

Ⅰ瓊脂糖膠體132

Ⅱ 瓊脂糖膠體中DNA的染色135

Ⅲ 膠體中核酸的照像法136

Ⅳ 乙二醛膠體138

21.轉移DNA於硝化纖維或者重氮化濾紙上的程序140

Ⅰ轉移瓊脂糖膠體中的DNA至濾紙上的程序140

Ⅱ 轉移λ溶菌斑中的DNA至濾紙上的程序142

Ⅲ 轉移菌落中的DNA至濾紙上的程序145

22.裂口轉移法製造α—32P—標誌的DNA147

Ⅰ作用程序147

Ⅱ 去氣核糖核苷三磷酸塩148

Ⅲ 去氧核糖核酸酶148

Ⅳ 82P併入DNA之程度的測定148

Ⅴ 輻射性DNA的回收149

Ⅵ 一般要點150

23.DNA或RNA在固體上的雜合作用152

24.固體上32P的自動輻射照像术155

25.回收瓊脂糖膠體上的DNA156

Ⅰ玻璃纖維濾片回收法156

Ⅱ 碘化鉀衡定密度梯度回收法158

Ⅲ 利用電泳促成膠體與羥基磷灰石間DNA的轉移158

26.利用EthidiumBromide迅速估計DNA濃度的方法160

Ⅰ瓊脂糖培養皿法160

Ⅱ 圖環上覆蓋塑膠紙的方法160

27.製備DNA的電子顯微鏡樣品161

Ⅰ水溶液程序161

Ⅱ 甲醯胺程序162

28.形成雙股雜合DNA的一般程序164

Ⅰ雙股雜合DNA的製造164

Ⅱ 製備雙股雜合DNA的電子顯微鏡樣品164

29.λcI857Sam7潛溶的株體內酶類的抽取與純化166

Ⅰ一般程序166

Ⅱ 大腸菌594溶菌液中DNA眾合酶I的純化程序167

Ⅲ 純化大腸菌E1150溶菌液中的T4DNA接合酶169

第三部份：附錄171

1．培養基，药物濃度與補充營養172

Ⅰ培養基172

Ⅱ 药物濃度177

Ⅲ 補充營養177

2.營養缺陷突變菌株的鑑定179

3．細菌，噬菌體與DNA的貯存方法181

Ⅰ細菌及噬菌體的貯存181

Ⅱ 貯存的程序181

Ⅲ DNA的貯存182

4.緩衝液以及其他溶液184

Ⅰ緩衝液185

Ⅱ 其他溶液及濃度186

5．透析膜袋的清洗與處理188

6．度量衡189

Ⅰ微升之量189

Ⅱ DNA的溶點溫度190

Ⅲ 离心的速度與時間191

Ⅳ 單位換算192

7.利用限制酶修剪DNA193

Ⅰ方法193

Ⅱ 各種限制酶的特性194

8.λ噬菌體攜帶細菌DNA的能力197

9.λ噬菌體與pBR322質體的遺传結構圖以及限制酶作用的位置198

Ⅰλ遺传結構圖與2媒介噬菌體198

圖1 λ遺传結構圖200

圖2 —3限制酶的限制座201

圖4 λgt1—λBDNA上的EcoRI限制座203

圖5 λgt4DNA上的EcoRI限制座204

圖6 λgt5—lac5DNA上的EcoRI限制座205

圖7 λgt7—ara6DNA上的EcoRI限制座206

圖8 λ607DNA上的EcoRI限制座207

圖9 λsep6—lac5DNA上的EcoRI限制座208

圖10 Charon4DNA上的EcoRI限制座209

圖11 λ590DNA上的HindⅢ限制座210

圖12 λ760DNA上的HindⅢ限制座211

圖13 λgt30—Ec6DNA上的SalI與XhoI限制座212

圖14 λgt40DNA上的SstI限制座213

ⅡPBR322的遺传結構圖214

圖15 PBR322的遺传結構圖215

10.組氨酸操縱基因群的缺失突變圖216

11．用於主培養皿製備的格子紙规格217