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第一章电子显微镜学1

1-1 电子显微镜学的历史与目的1

绪言1

历史5

1-2 穿透式电子显微镜的构造与利用7

构造7

解像力与波长7

1-3 扫描式电子显微镜的构造与到用13

穿透式电子显微镜16

1-4 电子显微镜学样品的制备16

扫描式电子显微镜17

第二章穿透式电子显微镜的化学固定法19

2-1 绪言19

化学固定的目的与影响19

化学固定的一般反应20

2-2 影响化学固定的因子21

缓冲液和酸碱度21

张力22

时间长短24

温度24

电解质与非电解质24

样品大小25

清洗25

2-3 固定步骤25

一般评论25

原处固定法27

灌流固定法28

2-4 化学固定剂的种类29

绪言29

一般固定步骤29

四氧化锇30

与脂质的作用30

与蛋白质的作用33

与碳水化合物的作用33

反应摘要34

四氧化锇的使用34

与四氧化锇合用的缓冲液配方36

(1)Palade(1952)醋酸佛罗那缓冲锇37

(2)Dalton(1955)铬一锇固定剂(1%)39

(3)Millonig(1961b)磷酸缓冲锇(1%)40

(4)Sorensen氏之磷酸缓冲液(Mc Clean及Cook,1952)及锇(1%)41

(5)Kellenberger等氏(1958)醋酸佛罗那缓冲之锇(1%)43

四氧化钌44

醛类之介绍44

戊二醛(戊二酸二醛)45

与蛋白质的作用46

与其他细胞成分的作用47

戊二醛的操作47

丙烯醛49

甲醛(福马林,甲酸—醛)50

(1)Pease(1964)磷酸缓冲之甲醛(10%)52

醛类之缓冲液配方52

醛类摘要52

(2)Sabatini等氏(1962),二甲次砷酸缓冲之戊二醛(5%)53

(3)Holt及Hicks(1961b),S—胶吡啶缓冲之戊二醛(5%)55

(4)Millonig(1961b),磷酸缓冲之戊二醛(10%)60

(5)Gibbs(1962),海产固定剂,醋酸佛罗那缓冲之戊二醛(5%)61

(6)Ramuss(1969),二甲次砷酸盐-蔗糖缓冲之戊二醛(5%)62

(7)Luft(1959),二甲次砷酸盐缓冲之丙烯醛(5%)63

(8)Karnovsky(1965),二甲次砷酸盐缓冲之戊二醛-甲醛(各3%)64

(9)Dawes(1969b),磷酸缓冲之戊二醛-丙烯醛(各3%)65

高锰酸(MnO4)66

(10)Hirsh及Fidorko(1968)同时固定(戊二醛及四氧化锇)66

高锰酸盐之操作67

高锰酸盐用缓冲液配方68

(1)Luft(1956),醋酸佛罗那缓冲之高锰酸盐(0.6%)68

(2)Mollenhauer(1959),未缓冲之高锰酸盐(5%)。69

(3)Dawes及Rhamstine(1967),醋酸佛罗那盐缓冲之高锰酸盐(0.6%)69

(4)Dawes及Rhamstine(1967),海水缓冲之高锰酸盐(0.6%)70

第三章穿透式电子显微镜包埋材料之制备71

3-1 组织操作71

3-2 清洗71

3-3 脱水72

3-4 以水溶性塑胶作脱水剂74

3-5 脱水步骤75

乙醇-环氧丙烷或丙酮-缓慢步骤76

乙醇-环氧丙烷或丙酮-迅速步骤77

丙酮脱水77

无限稀释77

第四章 包埋79

4-1 绪言79

4-2 塑胶之处理80

4-3 渗透81

4-4 胶囊包埋82

4-5 平式包埋86

4-6 颗粒样品包埋(预包埋)87

洋菜预包埋88

牛蛋白素预包埋90

组织培养之三明治式包埋90

易碎样品之包埋90

第五章 塑胶93

5-1 绪言93

5-2 甲基丙烯酸酯类(丙烯树酯类)94

一般资料96

塑胶混合物及包埋96

5-3 聚酯树脂(羟基醇类)98

聚酯树脂配方99

(1)Vestopal W(Ryter及Kellenberger,1958)99

(2)Rigolac(Kushida,1960)100

5-4 环氧树脂(环氧乙烷塑胶类)101

环氧树脂类之化学101

(1)Epon及Araldite树脂102

(2)ERL-4206103

硬化剂的化学104

(1)十二烯基丁二酐(DDSA)104

(3)其他的环氧树脂104

(2)Nadic methyl anhydride(NMA)105

(3)Nonenyl succinic anhydride(NSA)105

塑化剂的化学105

(1)二丁基苯二甲酯105

加速剂的化学(催化剂)106

(1)苯二甲胺(BDMA)106

(2)DER 736106

(2)2,4,6 Tris(dimethyl aminomethyl)phenol(DMP-30)107

(3)Dimethyl amino methyl phenol(DMP10)107

(4)二甲基氨基乙醇(DMAE,S-1)107

酸酐-环氧系统之硬化机制108

环氧塑胶的去除109

环氧树脂配方(非水溶性)110

(1)Glauert及Glauert氏之英国Araldite(1958)110

(2)Luft氏之美国Araldite(1961)111

(3)Coulter(1967)氏之Luft氏Araldite之改良111

(5)Cargille氏之美国Araldite(1962)112

(4)Fineran及Bullock(1972)氏之Luft氏Aral-dite之改良112

(6)Luft氏之Epon(1961)113

(7)Coulter氏(1967):Luft氏Epon之改良115

(8)Spurr氏(1969)之低粘度包埋介质115

(9)Mollenhauer氏之Epon-Araldite混合物(1963)116

(10)Freeman及Spurlock氏之Maraglas混合物(1962)117

5-5 水溶性塑胶之包埋119

Durcupan119

(1)Stabbi氏(1960)之纯Durcunan119

(2)Kushida氏(1964)之组合性Durcupan120

(3)Staubi氏(1963)之Durcupan-Araldite步骤121

甲基丙烯酸乙二酯(GMA)121

(1)Leduc及Bernhard氏(1967)之甲基丙烯酸乙二酯122

第六章 样品块之修整与切片刀125

6-1 样品块之修整125

初步修整125

最後修整126

6-2 切片刀127

金属刀129

钻石刀129

钻石刀的使用131

钻石刀的清洁132

玻璃刀133

玻璃刀的制作原理133

玻璃刀的制作135

第七章切片及超薄切片机141

7-1 原理之考虑141

7-2 超薄切片之劈裂理论142

7-3 切片历史之大要144

7-4 超薄切片机145

7-5 切片148

7-6 切片的处理152

7-7 困难的补救155

第八章染色(增强对比度)157

8-1 绪言157

8-3 染色步骤162

组织块染色166

切片染色167

铅染色169

铅化合物的反应171

铅染色的步骤172

(2)柠檬酸铅(Venable及Coggeshall,1965)173

(1)氢氧化铅的柠檬酸盐钳合物(Reynolds,1963)173

(3)高浓度的柠檬酸铅174

(4)氢氧化铅的酒石酸钳合物(Millonig,1961a)174

(5)氢氧化铅的环醋酸钳合物(Dalton及Zeigel,1958)175

(6)氢氧化铅的钳合物(Dalton及Zeigel,1960)175

(7)氢氧化铅(Karnovsky,1961)176

(8)氢氧化铅(Watson,1958b)176

(9)氢氧化铅(Converse,私人联系)177

铀氧基染剂177

铀氧基染剂的反应178

铀氧基染色步骤179

(1)组织块染色,醋酸双氧铀(Terzakis,1968)179

(2)切片染色,醋酸双氧铀(Watson,1958a)180

(3)切片染色,硝酸双氧铀(Zobel及Beer,1961)180

(4)双重染色180

磷钨酸染剂181

PTA的反应182

(1)使用PTA的酒精溶液作组织块染色182

(3)PTA-铬酸(Roland等氏,1972)183

(2)使用PTA的酒精溶液作切片染色183

高锰酸盐染剂184

(1)切片染色184

(2)组织块染色184

(3)三重染色(Soloff,1973)184

锇染剂185

(1)四氧化锇185

(2)四氧化锇-碘化锌(Maillet,1968)185

(4)锇-对苯二胺(Ledingham及Simpson,1972)186

(3)与锇结合之染剂(Seligman等氏,1968)186

(5)丙烯酸-四氧化锇(Herbert等氏,1972)187

(6)OTO方法(Hanker等氏,1966;Seli-gman等氏,1966)187

银染剂189

(1)高碘酸-银染色法(Martino及Zamboni,1967)190

(2)高碘酸-铬酸-银染色法(Mowry,1959)191

191

(1)胶质的甘油铁胺(Rinehart及Abul-Haj,1951)192

193

(1)组织块染色(Ramboug及LeBlond,1967)193

194

(1)组织块染色194

(2)切片染色(Revel,1964)194

(2)特殊切片染色195

(3)一般目的之切片染色196

196

(1)三氯化铟及阻碍反应(Watson及Aldridge,1961,1963)196

(2)非特殊性铟染剂(Sheffield,1964)197

198

(1)硫酸钒198

(2)钼酸钒198

198

(1)钉红-四氧化锇(Siew及Wagner,1968)199

钌红199

(2)钌红-细胞外染色(Brooks,1969)200

在放射活性基上金或银的沈淀200

第九章 碳及金属覆膜、铸模及颗粒样品203

9-1 高真空蒸著机203

抽气系统203

钟罩与底盘204

控制器204

计量器204

9-3 金属投影207

9-2 碳的蒸著207

9-4 扫描式电子显微镜用之覆膜210

9-5 铸模211

Henderson(1969)的纤维素-醋酸铸模技术214

Wardrop(1974)的湿铸技术215

9-6 颗粒性样品219

碎断219

移置220

整体移置的投影法223

整体移置的负染色法224

(1)以牛血清为底基的磷钨酸染剂225

(2)以淀粉为底基的磷钨酸染剂226

(3)以蔗糖为底基的磷钨酸染剂226

(4)醋酸双氧铀染剂226

(5)蚀刻後环氧树脂切片的负染色226

第十章 厚切片及筛片制备227

10-1 厚切片染色227

(1)甲苯胺蓝228

(2)四甲基蓝—蔚蓝Ⅱ228

(4)结晶紫229

(5)多重染色法(Van Reempts及Brogers,1975)229

(3)碱性品红229

10-2 样品筛片的种类230

10-3 筛片清理231

10-4 塑胶支持膜232

方法Ⅰ.在玻璃上成型235

方法Ⅱ.在水面成型235

方法Ⅲ.在水面成型236

多孔塑胶膜的制备238

方法Ⅰ.塑胶上之碳膜239

10-5 碳支持膜239

方法Ⅱ.云母上之碳膜240

方法Ⅲ.玻璃上之碳膜240

方法Ⅳ.化学方法分裂之石墨膜241

第十一章 样品制备的物理技术243

11-1 绪言243

11-2 低温技术243

冷冻、取代、防冻244

冷冻取代245

冷冻乾燥249

冷冻刻裂与蚀刻251

原理256

11-3 临界点乾燥256

步骤258

第十二章 扫描式电子显微镜学的制备技术263

12-1 绪言263

12-2 加速电压的选择264

乾燥、坚固的样品265

细致的组织:脱水及乾燥265

导论265

12-3 扫描式电子显微镜生物样品的制备265

细致的组织:冷冻乾燥267

细致的组织:临界点乾燥269

未固定,未覆膜的新鲜或冷冻组织270

部分包埋272

刻裂及蚀刻273

染色274

第十三章 摄影学275

13-1 绪言275

13-2 摄影的化学275

曝光276

对比276

13-3 电子记录的理论276

片速与粒性278

解像力与散布函数280

电子检出(DQE)280

电子显微像理论及应用281

13-4 放大率与解像力的决定282

13-5 一般暗房程序282

13-6 负片显影283

软片的显影284

版片或单张片的显影285

13-7 印相片及放大286

13-8 穿透式电子显微镜学用之软片294

幻灯机幻灯版片295

柯达电子影像版片295

柯达电子影像软片(4463)296

杜邦可乐娜单张软片297

柯达微粒正片(35mm)297

一般的相纸及处理机297

13-9 扫描式电子显微镜之摄影学298

参考文献301

Ⅰ-3 一般供应品公司323

Ⅰ-2 扫描式电子显微镜323

附录Ⅰ.商品来源323

Ⅰ-1 穿透式电子显微镜323

Ⅰ-4 钻石刀324

Ⅰ-5 玻璃刀制作器324

Ⅰ-6 超薄切片机325

Ⅰ-7 样品筛片325

Ⅰ-8 四氧化锇及其他特殊药剂325

Ⅰ-9 喷覆覆膜机及高真空蒸著机的附件325

Ⅰ-11 临界点乾燥器326

Ⅰ-12 冷冻刻裂及冷冻乾燥装置326

Ⅰ-10 高真空蒸著机326

附录Ⅱ.样品制备程序327

Ⅱ-1 穿透式电子显微镜学327

固定327

脱水328

包埋328

样品块修整及筛片制备329

切片及染色329

Ⅱ-2 扫描式电子显微镜学329

英中名词对照表331

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