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第一章 超薄切片技术1

1.1 概述1

1.2 取材3

1. 取材的基本要求3

2. 取材方法4

1.3 固定5

1. 固定的概念5

2. 常用固定剂的性质5

3. 常用缓冲液的配制10

4. 常用固定液的配制15

5. 固定方法18

6. 影响固定效果的因素21

7. 良好固定的标准23

1.4 清洗与脱水24

1.5 浸透与包埋25

1. 目的与要求25

2. 常用包埋剂的性质与配方26

3. 浸透与包埋的操作33

4. 所埋损伤36

5. 包埋操作中的注意事项37

1.6 超薄切片38

1. 支持膜的制备38

2. 包埋块的修整45

3. 玻璃刀的制作46

4. 超薄切片51

1.7 超薄切片的染色60

1. 电镜图象反差形成的原理60

2. 染色的必要性61

3. 染色方法62

参考文献71

第二章 负染色技术73

2.1 负染色的原理73

1. 直接取样74

2. 样品提纯的方法74

2.2 悬液样品的制备74

3. 病毒样品的浓缩方法75

2.3 染色液的配制76

2.4 染色方法77

1. 滴染法77

2. 喷雾法77

3. 漂浮法77

2.5 影响染色效果的主要因素78

1. 样品的纯度78

2. 样品的浓度78

3. 样品与染液的均匀分散性78

参考文献79

2.6 对照样品的染色79

4. 悬液与染液的酸碱度79

5. 染色时机79

第三章 金属投影与复型技术81

3.1 金属投影技术81

1. 真空喷镀仪简介81

2. 蒸发材料的性质82

3. 投影方法84

4. 颗粒大小的测量87

5. 影响投影效果的因素88

3.2 复型技术89

1. 一级复型89

2. 二级复型90

参考文献91

第四章 样品的冷冻(冰冻)制备技术92

4.1 概述92

1. 生物样品中水分的存在方式92

2. 冰晶的形成及其对细胞活性的影响93

3. 冷冻剂与保护剂94

4.2 冷冻干燥技术95

4.3 冷冻取代技术97

4.4 冷冻切片技术98

1. 仪器的准备98

2. 样品的预处理101

3. 样品的冷冻102

4. 切片操作103

5. 切片的收集与染色103

4.5 冷冻断裂(刻蚀)复型技术104

1. 冷冻断裂及刻蚀装置105

2. 冷冻断裂(刻蚀)复型的制作109

3. 冷冻复型电镜图象的辨认118

参考文献121

5.1 蛋白质的细胞化学技术123

1. 酶的细胞化学技术123

第五章 电镜细胞化学技术123

2. 蛋白质的细胞化学技术136

5.2 核酸的细胞化学技术138

1. 醋酸铀染色法138

2. DNA的Feulgen-六亚甲四胺银特异染色法139

3. RNA的选择性染色139

5.3 碳水化合物的细胞化学技术140

1. 过碘酸-六亚甲四胺银法140

2. 氨基硫脲蛋白银法141

3. 酸性粘基质的定位142

2. 用洋地黄皂苷保存胆固醇的方法143

1. 保存脂肪的脱水方法143

5.4 脂肪的细胞化学方法143

3. 磷脂的保存方法144

5.5 某些无机离子的细胞化学定位144

1. 钙离子的定位144

2. 磷酸盐的定位145

3. 某些重金属离子的定位145

5.6 提取定位法147

1. 核酸的提取定位法147

2. 蛋白水解酶的应用149

3. 多糖的提取定位法149

参考文献150

6.1 抗原的选择152

第六章 免疫电子显微镜技术152

6.2 抗体的分离与提纯153

1. 抗体的一般特性153

2. 特异性抗体的分离与提纯155

3. 抗体片段的制备159

6.3 抗体的标记技术160

1. 铁蛋白标记技术160

2. 酶标记技术168

3. 杂种抗体标记技术171

4. 免疫酶搭桥法174

1. 铁蛋白标记抗体(Fer-Ab)的电镜染色175

6.4 电镜样品的制备175

2. 酶标记杭体的电镜染色180

6.5 对照实验181

1. 特异抗体的封闭对照182

2. 特异抗原的吸收对照182

3. 非特异性对照182

参考文献182

第七章 电镜放射自显影技术185

7.1 原理185

7.2 放射自显影用的同位素186

1. 能量特征186

2. 半衰期187

3. 剂量与毒性188

7.3 电镜自显影样品的制备189

1. 标本的标记189

2. 厚切片及超薄切片的制备190

3. 乳胶的选择、稀释与敷膜191

4. 曝光198

5. 显影与定影199

6. 样品的后处理201

7.4 对照观察202

1. 本底颗粒的测量202

4. 排除标记产物扩散的可能性204

2. 排除假阳性的对照实验204

3. 排除假阴性的对照实验204

5. 抑制剂的应用205

7.5 放射自显影照片的分析205

1. 误差与分辨率205

2. 定量分析方法211

参考文献214

第八章 生物大分子电镜样品的制备技术216

8.1 概述216

8.2 蛋白质分子电镜样品的制备技术218

1. 对蛋白质溶液的要求218

2. 低噪声支持膜的制备219

3. 蛋白质大分子的负染色技术220

4. 电镜观察时应注意的问题222

5. 蛋白质大分子电镜研究的进展223

8.3 核酸大分子电镜样品的制备技术225

1. 电镜观察核酸的基本原理225

2. 实验方法与步骤226

3. 电镜观察时应注意的问题234

参考文献235

第九章 扫描电子显微镜及生物样品制备技术236

9.1 扫描电子显微镜的特点236

1. 结构237

9.2 扫描电镜的结构及工作原理237

2. 工作原理242

9.3 生物样品制备方法242

1. 新鲜材料直接观察243

2. 化学的方法243

3. 物理的方法243

4. 临界点干燥法244

5. 特殊的样品制备方法248

9.4 各类样品制备的一般程序253

1. 动物的软组织253

3. 昆虫254

2. 游离细胞254

4. 植物255

参考文献257

主要参考书258

第十章 透射电子显微镜的基本原理及其结构259

10.1 电子光学的基本知识260

1. 光学显微镜的局限性260

2. 电子成象的基本原理264

10.2 透射电镜的结构及工作原理268

1. 结构概貌268

2. 主要部件的结构及功能271

主要参考书279