《微生物化学分类的实验方法》求取 ⇩

目录1

1．细胞壁7

Ⅰ　细菌的细胞壁8

1．细胞壁和细菌分类8

2．作为对象物的细胞壁构成成分11

1）肽聚糖11

a．肽部分的结构11

b．糖部分的结构14

2）其他高分子化合物15

a．脂多糖（lipopolysaccharide;LPS）15

b．磷壁酸类16

c．细胞壁多糖18

3．细胞壁的制备方法18

1）菌体的准备19

a．机械破坏法21

2）破坏菌体的方法21

b．化学处理法25

3）差示离心分离28

a．低速离心分离（未破坏菌的去除）29

b．中速离心分离（其他可溶成分的去除）29

4）细胞壁的精制方法30

a．蛋白酶处理30

b．化学处理31

5）细胞壁的含量及纯度33

4．细胞壁类型的确定方法35

1）特异氨基酸类型的确定法35

2）氨基酸组成比的确定36

a．用氨基酸自动分析仪对细胞壁氨基酸的分析37

b．氨基酸（糖）的鉴定38

c．氨基酸立体配置的确定41

d．氨基酸量比的确定42

a．利用“化学法”确定肽结构43

3）肽类型的确定方法43

b．肽类型的命名45

4）糖部分的N-酰基型的确定方法46

a．Glycolate test的实施方法51

b．羟乙酰基的含量及酰型的菌种间分布53

5．其他细胞壁成分的分析方法56

1）脂多糖（LPS）的制取与分析56

a．脂多糖的制取56

b．脂多糖的分析57

2）磷壁酸的制取与分析58

3）多糖的制取与分析59

6．特殊细菌的细胞壁60

Ⅱ　放线菌的细胞壁62

1）培养及分析用菌体的制备方法65

1．分析用试料的制备65

2）细胞壁的制备方法66

2．细胞壁组成成分的分析67

1）用全菌体进行二氨基庚二酸（A2pm）及糖的分析67

a．二氨基庚二酸的分析实例67

b．糖的分析实例69

2）细胞壁氨基酸及糖70

a．氨基酸的分析实例70

b．糖的分析实例72

3．以细胞壁组成成分作为主要指标的属的检索72

Ⅲ　酵母的细胞壁79

1．培养86

2．多糖类的制取87

1）甘露聚糖的制取87

2）可溶性多糖类的制取89

3．结构糖分析90

1）水解法91

2）利用薄层光谱分析法分析结构糖91

3）利用气相色谱分析结构糖93

4．1H-NMR光谱的测定95

文献101

2．脂类116

Ⅰ　复合脂116

1．磷脂116

1）细菌磷脂的结构与一般性质116

a．细菌磷脂的结构117

b．磷脂组成对环境的适应及变化123

2）细菌磷脂的分析方法124

a．磷脂的提取方法124

b．磷脂的分离和鉴定125

c．细菌磷脂及其组成成分的定量129

d．利用标记化合物对磷脂进行定性和定量（Kaufer和Kennedy,1963）131

e．细菌磷脂的仪器分析及结构确定132

3）细菌磷脂的分布133

a．Pseudomona dales133

b．Eubacteriales（真细菌）142

c．Actinomycetales143

d．Mycoplasmatales143

e．Archaebacteria145

2．糖脂145

1）甘油糖脂的分离·鉴定方法146

a．萃取·精制146

b．糖及脂肪酸的鉴定146

c．脱酰基化合物的分析147

d．糖的结合部位的解析148

e．糖的异头物的配位分析148

a．甘油糖脂149

f．其他种类结构的分析方法149

2）微生物糖脂的种类与分布149

b．磷糖脂153

c．糖醛酸含有的糖脂155

d．硫糖脂155

e．脂肪酸糖157

3．脂氨基酸158

1）鸟氨酸脂的分离与鉴定158

a．萃取、精制158

b．红外光谱159

c．氨基酸的鉴定160

d．脂肪酸的鉴定160

e．游离氨基的鉴定160

a．鸟氨酸脂161

2）脂氨基酸的种类与分布161

g．其他分析161

f．游离羧基的鉴定161

b．牛磺鸟氨酸脂163

c．赖氨酸脂165

d．磷脂酰甘油的O-氨基酸酯165

4．鞘脂类166

1）鞘脂的分离169

Ⅱ　单纯脂171

1．霉菌酸171

1）霉菌酸的一般结构172

2）霉菌酸的结构分析方法172

3．霉菌酸的薄层色谱法（TLC）175

b．霉菌酸的气相色谱法（GLC）177

c．霉菌酸的质谱分析GC/MS178

d．霉菌酸的高速液体色谱法（HPLC）181

3）霉菌酸的分布和Actinomycetales的化学分类学182

2．泛醌和甲萘醌185

4）霉菌酸分子组成因环境条件而引致的变化185

1）微生物的培养188

2）细菌的泛醌和甲萘醌的提取188

3）酵母及真菌的泛醌提取189

4）泛醌和甲萘醌的精制190

5）泛醌和甲萘醌分子种类的鉴定191

6）有关泛醌系和甲萘醌系的表示方法198

3．脂肪酸200

1）脂肪酸组成的确定方法201

a．培养202

b．脂肪酸甲基酯的制备202

c．气相色谱分析205

d．菌体脂肪酸组成的表示方法216

2）分类群与菌体脂肪酸219

3）分析数据的数量处理220

文献221

3．蛋白质247

Ⅰ　电泳类型248

1．试料的制备方法249

1）微生物的培养249

2）菌体的破碎250

2．电泳法251

1）电泳装置252

2）平板凝胶的制作253

3）电泳259

4）染色260

a．蛋白质的染色260

b．酶的活性染色261

3．数据处理与电泳类型在分类上的应用实例266

1）测光密度法267

2）相对移动度与数值分类268

4．酶的电泳类型的分类学意义276

Ⅱ　细胞色素277

1．细胞色素的种类和微生物的电子传递体系277

2．细菌的生育条件和细胞色素280

3．细胞色素的吸光度测定281

1）Pseudomonas的细胞色素测定281

2）全细胞色素的（还原型）-（氧化型）的差示光谱282

3）（还原型＋CO）-（还原型）的差示光谱287

4）低温光谱288

5）细胞色素的个别（还原型）-（氧化型）表示光谱289

4．微生物分类与细胞色素289

4．核酸299

1．DNA的分离精制302

1）概况302

a．SSC304

2）使用试剂304

b．EDTA305

c．酚305

d．SDS305

e．链霉蛋白酶306

3）培养306

4）溶菌307

5）蛋白质的变性311

6）离心分离312

7）粗DNA的卷绕313

8）精制314

9）后处理与保存316

10）DNA的测定317

2．GC含量的测定318

1）概况318

2）融解温度的测定319

1）概况323

3．DNA-DNA杂交323

2）方法分类328

3）利用UV吸收测定反应速度的方法329

4）使用核酸酶对无标记DNA的双链形成速度进行测定的方法331

5）有关放射性同位素的利用方法335

a．概况335

b．回收标记法337

c．利用放射性碘进行标记340

d．切口转移标记法341

e．放射能的测定344

6）标记DNA与核酸酶的使用方法346

7）使用羟磷灰石（HA）的方法349

8）使用滤膜的方法354

1）基本情况359

4．DNA-RNA杂交359

2）有关RNase的注意事项362

3）RNA的标记方法362

4）rRNA的制备364

5）杂交实验367

文献369

5．免疫学的方法376

1．抗原377

2．免疫血清的制备378

3．凝胶内沉降反应380

4．中和反应383

5．补体结合反应385

文献387

6．热分解法388

1．使用仪器389

2．试料的制备392

1）条件的设立395

3．热分解395

2）焦油问题396

3）操作397

4．气相色谱分析398

1）条件的设立398

2）操作398

5．数据分析399

1）视觉鉴定401

2）峰的测定402

3）根据少数峰加以判断404

文献407

7．数据分析410

1．数值分类412

1）代码化414

a．简易识别和代码化414

b．RKC代码系统416

c．数值分类与代码化417

2）相似度420

a．O-1型数据421

b．数值型数据424

3）树状图（数值分类）430

2．多元分析439

1）何谓多元分析439

a．树状图批判440

b．推算统计学和多元分析441

c．维数的减少和存在问题444

d．有关程序等情况446

2）应用于分类的多元分析447

a．主成分分析448

b．典型相关分析450

c．多维尺度法452

d．判别分析454

文献458