《表3 alsD基因克隆的反应程序》

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《枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因(alsD)的克隆和生物信息学分析》

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使用细菌基因组DNA抽提试剂盒（Bacteria gDNA Mini Kit）提取Bacillus subtilis CICC10026基因组DNA，操作步骤参照试剂盒说明进行。以菌株基因组DNA（gDNA）为模板，alsD-up和alsD-down为引物PCR扩增alsD基因。反应体系如表2所示，反应程序见表3。使用胶回收试剂盒对PCR反应扩增出的目的片段进行回收（回收步骤参见试剂盒说明书进行）。纯化回收的产物与p MD18-T载体连接，随后将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞。对蓝白筛选出的阳性克隆子进行菌落PCR验证，并提取阳性重组克隆质粒，选用XbaI和BamHI对质粒进行双酶切验证。将筛选出的阳性克隆菌液送至博仕生物工程有限公司进行测序，重组克隆质粒标记为“pTHF-alsD”。