《表3 PCR反应条件：蒺藜苜蓿B561基因的克隆及对拟南芥的转化》

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《蒺藜苜蓿B561基因的克隆及对拟南芥的转化》

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注:加粗部分:步骤循环30次

使用植物总RNA试剂盒法提取蒺藜苜蓿叶片的总RNA，使用反转录试剂盒获得第一链cDNA，以cDNA为模板，pBI-B561-f和pBI-B561-r为引物进行PCR扩增，PCR程序为：94℃预变性反应10 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，25个循环；72℃延伸5 min，12℃保温。将PCR产物和pBI121通过XbaⅠ/SmaⅠ双酶切处理，纯化回收后，在温度为16℃条件下利用T4连接酶反应6 h，进行连接。之后将其转进大肠杆菌DH5α中，并在LB（添加了50 mg/L Kanamycin）培养基上37℃恒温箱过夜培养。使用引物pBI-f和pBI-r对单菌落进行菌落PCR检测，PCR反应条件已设置（表3）。