《表2 引物序列表:细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用及机制》

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《细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用及机制》


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注:Islet1.胰岛素增强结合因子-1;Ins.胰岛素;Pdx1.胰岛素启动子因子-1;Sense.正义;Antisense.反义。

将上述转染好的β-TC6细胞,利用ChIP富集乙酰化H3抗体结合的DNA片段,并采用DNA产物纯化试剂盒对其进行纯化,得到纯化DNA产物。将Islet1、Ins和Pdx1基因DNA序列的第一外显子5’端前1 000 bp DNA序列视为启动子区设计引物,用q PCR定量分析纯化产物的基因表达。以未转染细胞为空白对照(空白组)。各组实验重复3次。反应条件:95℃10 min,95℃5 s,60℃30 s,共40循环。使用双ΔCt法分析结果,2-ΔΔCt表示样品特异性背景免疫沉淀(IP)富集倍数。以Scrambled siRNA组为阴性对照(S1),分别计算样品组(S2)中空白组(S21)和E1-siRNA组(S22)胰岛素分泌相关基因Islet1、Ins和Pdx1的相对富集比值,富集比值=2-ΔΔCt(S2-S1)。引物序列见表2。