《表1 引物序列：二苯乙烯苷对冈田酸致NG108-15细胞Tau蛋白磷酸化的影响》

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《二苯乙烯苷对冈田酸致NG108-15细胞Tau蛋白磷酸化的影响》

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采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测。取对数生长期的NG108-15细胞适量，以6×105个/孔接种于6孔板中，培养24 h。按“2.3”项下方法分组，每组设3个复孔。正常对照组加入完全培养基1 mL，各含药组加入含相应药物的完全培养基1 mL，继续培养24 h。除正常对照组外，其余各组均按“2.2”项下方法复制AD细胞模型。随后采用Trizol法抽提细胞总RNA，使用微量核酸蛋白分析仪检测RNA浓度及纯度（即A260 nm/A280 nm；当A260 nm/A280 nm为1.8～2.1，表明RNA的纯度较高），将提取的RNA按试剂盒步骤进行去DNA和逆转录后，采用两步法以实时荧光定量PCR仪进行扩增。反应体系（共20μL）:上/下引物（引物序列见表1）各0.8μL、模板cDNA 2μL、2×TBⅡ?Premix Ex TaqⅡ10μL、50×ROX Reference Dye 0.4μL、无酶水6μL。反应条件:95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃延伸31 s，共40个循环。以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算各目的mRNA的相对表达量（Ct表示每个反应管内荧光信号强度达到设定阈值时所经历的循环数）。上述试验重复3次。