《表1 PCL2 shRNA靶点序列及相应互补序列》

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《构建干扰多梳状蛋白2的人胶质瘤U251细胞系》

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查阅文献获得针对人PCL2基因的shRNA序列AAGAGCACTCCAGACTCAGAA（人PCL2ORF全长为1782bp，NCBI Reference Sequence:NM-007358.3）。经设计，上游引物为5′-CATC-GATATGAGAGACTCTACAGGG-3′，下游引物为5′-GACTAGTTCAGGATGCAGTTGCTCC-3′。根据文献[8]将PCL2基因的shRNA克隆至mir30前体骨架shRNA的表达载体中（表1）。经限制性内切酶Xho I和EcoRI双酶切鉴定，及PAGE-ONE凝胶电泳检测。由此获得新的小干扰RNA表达载体pAd5E1-PCL2 shRNA。