《表2 稳定基因沉默的shRNA序列》

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《luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探》

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参考Darsigny等（2010）的方法，首先从大肠杆菌中提取pACYC184质粒，并用Bam HⅠ和SphⅠ将pACYC184酶切、回收，回收产物与携带相同酶切位点粘末端的小干扰RNA（表2）连接，构建重组质粒pACYC-LuxR。然后，将重组质粒热击转化入DH5α感受态细胞中，在氯霉素抗性平板（34μg/ml）上筛选阳性单克隆，将阳性单克隆送测序公司测序。测序正确的重组质粒电击转化入嗜水气单胞菌野生株B11，构建嗜水气单胞菌luxR05735稳定沉默菌株luxR05735-RNAi。