《表2 MYH14-shRNA的DNA序列Tab 2 DNA sequences of MYH14-shRNA》

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《慢病毒介导的shRNA干扰大鼠施万细胞RSC96 MYH14基因的表达》

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MYH14:Myosin heavy chain 14；shRNA:Short hairpin RNA

使用AgeⅠ/Bam HⅠ限制性内切酶对真核表达载体GV298进行双酶切使其线性化，将由shRNA反转录合成的DNA（表2）溶解于退火液中梯度退火。取线性化载体100 ng、双链DNA 100 ng、10×T4 DNA连接酶缓冲液2μL、T4 DNA连接酶1μL，加入双蒸水至总体系20μL，16℃静置过夜合成连接产物。取10μL产物加入到100μL感受态细胞中，冰上放置30 min；42℃激活90 s，冰浴2 min；加入500μL LB培养液，37℃摇床振荡培养1 h；取适量菌液均匀涂布在含有相应抗生素的平板上，恒温培养箱中倒置培养12~16 h。