《表1 p38MAPK的shRNA序列》

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《兔p38MAPK基因沉默腺病毒载体构建及体外干扰效率的鉴定》

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F:正向；R:反向

利用p38MAPK序列cDNA文库设计shRNA序列，经Blast表明其与小鼠其它cDNA序列不同源，合成3条含干扰序列的双链DNA oligo。根据p38MAPK序列设计shRNA，合成3个shRNA片段，合成序列见表1。DNA片段经由退火缓冲液完全退火后，3对片段分别用T4连接酶将其与pDC316-shRNA-ZsGreen连接起来。将10μL过夜连接产物转化100μL感受态细胞，涂于含氨苄西林的LB培养基上，37℃恒温培养箱培养过夜。在5mL，100μg/mL Ampicillin抗性的LB培养液中分别挑取1个单菌落接种培养，250r/min，37℃恒温摇床培养过夜。随后抽提质粒，分别用BamHⅠ和EcoRⅠ做酶切鉴定。构建的3组重组质粒分别命名为pDC316-ZsGreen-ShR-NA-1、2、3。