《表3 连续转化和补充碳源实验》

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《原儿茶酸的生物转化》

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连续转化和补充碳源对转化率的影响：在预实验中发现，转化3-4 h后反应液经HPLC检测，12 min处没有出现底物的吸收峰，即ρ-HBA已完全消耗，产物峰面积达到最大，4 h后产物不再增加；但是随着时间增加，产物在后续的摇瓶发酵过程中逐渐减少，至7 h后彻底消失。为了减少PCA的损耗和增加重组工程菌的利用率，设计了连续转化实验，对工程菌重复利用使其可以多次催化底物ρ-HBA。此外，在连续转化实验基础上对反应体系进行优化，加入了葡萄糖，一方面可以为工程菌提供正常生存所需的碳源，另一方面可以减少工程菌对PCA的吸收，从而降低其损耗量。表3为连续转化实验添加碳源前后底物ρ-HBA转化率及产物PCA的产量，从中能明显看出增加碳源能够有效增加工程菌的转化效率，减少PCA的损耗。可计算得出在未补充葡萄糖的条件下，连续转化反应完成后每升反应液可生产0.92 g PCA，补充葡萄糖后PCA产量可达1.156 g/L。