《表1 HEK293F细胞表达纯化rh-SPARC产率》

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《重组人SPARC蛋白对SKM-1细胞生物活性的研究》

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最终储存缓冲液:50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、200 mmol/L氯化钠、2 mmol/L氯化钙，p H7.4。用Nanodrop 2000测定该蛋白在280 nm处的浓度。1洗脱后产率为11.160/26.400=42.27%；2浓缩透析后产率为9.807/11.160=87.88%；3分子筛后产率为7.850/9.807=80.04%。

因预表达检测出有rh-SPARC蛋白的表达，所以扩大细胞培养体积至240 mL。在第7天收集细胞培养基，使用HisSeq Ni-NTA 6FF色谱柱纯化rh-SPARC蛋白（图2B）。浓缩rh-SPARC蛋白，并用Tris缓冲液（50 mmol/L Tris、300 mmol/L NaCl、2 mmol/L CaCl2）置换含有咪唑的洗脱液。SDS-PAGE显示洗脱样品含有非靶蛋白，我们使用分子筛进一步纯化洗脱蛋白质（图2C）。后用BSA作为对照评估rh-SPARC的浓度（图2D）。最后，在240 mL培养体系中总共得到7.85 mg rh-SPARC，终浓度为1.57 mg/mL，rhSPARC的产率为80.04%（表1）。