《表2 酪氨酸酶抑制率测定中的反应溶液组成Tab.2 Reaction mixture composition in the determination of tyrosinase activity

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《中华猕猴桃水提液清除羟自由基以及抑制酪氨酸酶活性的研究》

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酪氨酸酶又名多酚氧化酶，广泛存在于人、动植物以及微生物体内，是黑色素合成过程中所需的主要限速酶[9，10]。酪氨酸酶单酚酶能将酪氨酸羟化，产生邻位二羟基苯丙氨酸（L-DOPA），二酚酶可以将L-DOPA氧化成多巴醌，这类物质容易多聚化，并与细胞内蛋白作用，生成黑色或者棕色的色素沉着[11，12]。因此，通过抑制酪氨酸酶的活性可降低L-DOPA氧化成多巴醌的速率，减少黑色素的形成[13]。酪氨酸酶活性的测定是基于酪氨酸酶和L-多巴的酶催化氧化产物多巴色素（dopachrome）在475 nm处有最大吸收峰，其消光系数为3 700 L/（mol·cm）。酪氨酸酶反应活性定义:以每分钟多巴色素在475 nm处的吸光度值（A475）增加0.001为一个酶活力单位，即1 U/min。酪氨酸酶抑制率测定中的反应溶液组成见表2，以0.5 mmol/L L-酪氨酸或L-多巴为底物，摇匀后放置于37℃水浴中加热10 min后取出，分别加入0.4 m L 100 U/m L的酪氨酸酶水溶液，立刻摇匀，每隔30 s用紫外-可见分光光度计测定溶液在475 nm处的吸光度值A475，持续6 min，测定A475随时间的变化曲线，计算曲线的斜率即为酶活力。