《表1 Am DH及FDH的动力学参数》

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《固定化双酶耦联体系制备手性胺》

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对纯化的Am DH及FDH分别以苯氧基-2-丙酮和甲酸铵为底物，测定2个酶的动力学参数.反应体系中苯氧基-2-丙酮的浓度为1.25～60 mmol/L，甲酸铵的浓度为1.25～100 mmol/L，在其他条件相同的情况下，测定不同底物浓度下的Am DH及FDH酶活力，根据Michaelis-Menten方程计算米氏常数Km和最大反应速率Vmax（表1）.Km是表征酶与底物之间亲和力的常数，Km越小，表示酶与底物之间的亲和力越大，即达到最大反应速率1/2时所需要的酶量越小；kcat表示在最优条件下酶催化生成底物的速率.在表1中，根据动力学特征计算得到Am DH底物苯氧基-2-丙酮的Km=18.49 mmol/L，Vmax=0.22 mmol/（min·m L），FDH底物的Km=13.1 mmol/L，Vmax=0.23 mmol/（min·m L）.FDH的Km（NAD+）与Am DH的Km（NADH）数值相近，可以推测，在FDH与Am DH的耦联反应体系中，FDH对氧化型辅酶NAD+的需求量与Am DH对还原型辅酶NADH的需求量相当.kcat/Km的值是衡量一个酶催化效率的最重要参数，也是考虑了酶转化底物的最大速率与酶与底物之间亲和力的一个综合参数.