《表1 qPCR引物：GATA1通过上调NANOG促进胰腺癌肿瘤干细胞形成》

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《GATA1通过上调NANOG促进胰腺癌肿瘤干细胞形成》

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弃去培养基后用1×PBS清洗，加入1 mL PBS刮取细胞，3000 r/min离心5 min收集细胞，TRIzol裂解细胞，氯仿分层，异丙醇沉淀，乙醇清洗，干燥后DEPC处理水溶解，得到总RNA，测定浓度及纯度后进行反转录。反转录体系包括RNA 2μg、oligo（dT）1μL，加水至15.9μL，70℃反应5 min，立刻置于冰上，加入MMLV 1μL、5×MMLV缓冲液5μL、dNTP 2.5μL，RNase抑制剂0.6μL，充分混匀，42℃反转录1 h，95℃5 min灭活反转录酶，得到cDNA第一链，稀释至100μL。实时荧光定量PCR体系为TB Green Premix 10μL、上下游引物各0.4μL、cDNA模板9.2μL；每组设置3个重复孔，β-actin作为内参，采用2-ΔΔCt法计算mRNA的相对表达量。qPCR引物序列见表1。