《表1 引物序列:Ephrin B2上调促进非小细胞肺癌上皮间质转化及转移》

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《Ephrin B2上调促进非小细胞肺癌上皮间质转化及转移》


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提取转染后各组A5490NSCLC细胞中总RNA。使用Premier 5.0软件进行qRT-PCR引物设计,并由Invitrogen设计合成Ephrin B2、E-cadherin、N-cadherin,Vimentin以及MMP-2引物,GAPDH做内参照,引物序列见表1。使用PrimeScript RT试剂盒(RR036A,TaKaRa)将RNA逆转录成cDNA,逆转录体系10μl,参照说明书进行以2μg总RNA为模板,用GAPDH作为内参引物采用相对定量法(2-ΔΔCt法)计算目的基因Ephrin B2、E-cadherin(上皮细胞标记蛋白)、N-cadherin,Vimentin(间质细胞标记蛋白)、MMP-2 mRNA的相对转录水平:ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组,ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(内参)。实验重复3次。