《表1 PCR引物序列：FOXC2在肝外胆管细胞癌中的表达及其对肿瘤侵袭迁移和上皮间质转化的作用》

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《FOXC2在肝外胆管细胞癌中的表达及其对肿瘤侵袭迁移和上皮间质转化的作用》

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离心收集细胞转染后48 h的各组胆管癌细胞，TRIzol法提取各转染组细胞的总RNA。DNA酶处理后用NanoDrop2000检测RNA纯度，mRNA逆转录试剂盒进行逆转录生成cDNA，取2μL逆转录产物进行PCR检测，采用SYBR Green Master Mix反应体系进行扩增。PCR引物序列见表1。PCR反应体系总体积为20μL(1μL逆转录产物、10μL SYBR Green Mix、10μmol/L上下游引物各0.5μL，DEPC水8μL）；反应条件为：95°C预变性30 s，95°C变性5 s、60°C退火、72℃延伸30 s，共循环40次。采用GAPDH-mRNA作内参，检测各组胆管癌细胞FOXC2 mRAN相对表达。循环数法（2-ΔΔCt）定量相对表达量。